豬流感抗體檢測(cè)試劑盒

檢測(cè)原理

LSI 豬流感抗體檢測(cè)試劑盒（CIVTEST SUIS Influenza）是利用間接ELISA 方法建立的。特異的豬流感病毒被包被在96 孔板上。在反應(yīng)過(guò)程中，檢測(cè)樣本被加入反應(yīng)孔中，樣本中的特異性抗體會(huì)與孔中包被的特異性抗原反應(yīng)，在洗板的過(guò)程中不會(huì)被清洗掉，當(dāng)添加酶標(biāo)復(fù)合物時(shí)，這些酶標(biāo)復(fù)合物就會(huì)與豬的抗體發(fā)生反應(yīng)。沒(méi)有結(jié)合的酶標(biāo)復(fù)合物在洗板的過(guò)程中被清洗。在加入對(duì)氧化酶敏感的可以顯色底物。顯色的顏色深淺與樣本所含豬流感病毒的抗體濃度成正比。

Kit Composition (enough for 460 test)

包被豬流感抗原的96 孔板. 5

Vial Nº0: 洗液(x10). 250 ml

Vial Nº1: 綠色的樣本稀釋液(x3) 100 ml

Vial Nº2:酶標(biāo)復(fù)合物:紅色的標(biāo)記HRPO 的單克隆抗豬LgG 抗體. 可直接使用30 ml

Vial Nº3: 底物: ABTS. 可直接使用。30 ml

Vial Nº4: 底物終止液: 稀草酸. 可直接使用. 30 ml

Vial Nº5: 陽(yáng)性對(duì)照: 黃色的陽(yáng)性血清. 可直接使用. 2.2 ml

Vial Nº6: 陰性對(duì)照: 藍(lán)色的陰性血清. 可直接使用. 2.2 ml

覆蓋膜5

說(shuō)明書(shū)1

質(zhì)檢證書(shū). 1

在試劑盒的液體中使用了硫柳*等防腐劑。

必需的但沒(méi)提供的設(shè)備

37℃溫箱準(zhǔn)確移液器用于稀釋的容器酶標(biāo)儀滅菌或去離子水沖洗用具

用前準(zhǔn)備：

仔細(xì)閱讀說(shuō)明書(shū)，所有試劑在2-8℃條件下保存。不用時(shí)，所有的板條一定要用用封口膜密封，并存放在封口的塑料小袋中，防止潮氣對(duì)包被板的損傷。盡管在生產(chǎn)過(guò)程中，包被的抗原已經(jīng)被滅活，但包被的抗原仍被視為病毒的潛在來(lái)源。不要使底物接觸強(qiáng)光和氧化物。ABTS是一種敏感度很高的底物，取出后，不得再加回瓶中，試劑瓶中已多備了25%的試劑，*夠用。不要使用過(guò)期的成分或者不同批次試劑混合使用成分。注意加樣和沖洗，以確保試驗(yàn)的準(zhǔn)確度和準(zhǔn)確度。不能用嘴吸液。操作過(guò)程中使用手套，終止液是一種有機(jī)酸，具有腐蝕性，使用時(shí)要小心。所有的廢液要經(jīng)過(guò)處理和凈化。本品為獸用產(chǎn)品。

如果正確保存，沒(méi)有打開(kāi)的試劑，在到達(dá)標(biāo)簽指示的有效期時(shí)，也是很穩(wěn)定的。

檢測(cè)過(guò)程

試劑的準(zhǔn)備：

所有的試劑在使用前，必須回溫到室溫。

洗液（10X）：取1份清洗液加入9 份的滅菌水或去離子水中（如要配200ul的稀釋液清洗液，可取20ul 的濃縮液加入180ul的滅菌水或去離子水）。配好的液體，我們推薦在7 天內(nèi)用完。

樣本稀釋液（3X）：配制時(shí)用1體積的樣稀釋液中加入2 倍體積德的蒸餾水或者去離子水。（例如配制60ml 的樣本稀釋液, 可以取20ml 樣本稀釋液, 再加入40ml 的蒸餾水或者去離子水）配好的液體，我們推薦在2 天內(nèi)用完。

注意：清洗液由于鹽分高可能結(jié)晶，使用前必須搖勻溶解。需要整瓶試劑，可以利用反復(fù)顛倒混勻溶解。如果使用部分試劑，需要在室溫或者在28-37℃水浴條件下10-15 分鐘，將結(jié)晶溶解后，再配稀釋液。為了避免形成結(jié)晶，清洗液可保存在到室溫條件下。

B，樣本的準(zhǔn)備

陽(yáng)性對(duì)照，陰性對(duì)照已經(jīng)準(zhǔn)備好,不必稀釋, 樣本需要用樣本稀釋液進(jìn)行200倍稀釋，如果利用多道加樣器和96孔板進(jìn)行稀釋,推薦使用以下步驟:先吸取5ml 的樣本加入95ml 的樣本稀釋液中,混勻.再吸取5 ml 稀釋了20 倍的液體加入ELISA 反應(yīng)板孔,再加入45ml 的樣本稀釋液.

C．操作步驟：

A，將試劑放在室溫，并輕搖混勻

B，將樣本和對(duì)照加入板孔中。陽(yáng)性對(duì)照和陰性對(duì)照必須是雙份。

1，加入50ul 陽(yáng)性和陰性對(duì)照，及200 倍稀釋的樣品在反應(yīng)板孔.。

2, 蓋上膜,在37℃作用60 分鐘

3, 去膜,用300ul 的洗液洗3 遍,并在吸水紙上將平板弄干(顛倒,在紙上輕敲),

4, 在每個(gè)孔中加入50ul 酶標(biāo)抗體

5, 蓋上膜在37℃反應(yīng)60 分鐘

6, 去掉膜,用洗液(300ul)洗3 次,弄干

7, 加入50ul 的底物,輕搖板2 秒

8，將平板放在黑暗中在20-25℃作用15 分鐘

9, 加入50ul 的終止液,輕敲平板混勻

10,用柔軟的東西輕拭平板上的臟物,在405nm 下讀數(shù)并記錄結(jié)果

讀數(shù)

A. 實(shí)驗(yàn)成立條件：

陽(yáng)性對(duì)照OD450 > 0.7，而且陽(yáng)性對(duì)照平均值/陰性對(duì)照平均值> 5.5.

B. 結(jié)果的解釋

結(jié)果用IRPC 表示,. 以下是計(jì)算公式